Clonagem do cDNA e sequenciamento parcial do gene que codifica a enzima glutamato desidrogenase hepática de ovino

Autores

  • Sandra Regina de Mello
  • Kaio César Simiano Tavares
  • Carlos André da Veiga Lima Rosa
  • Luiz Claudio Miletti

Palavras-chave:

Glutamato desidrogenase, Clonagem do cDNA, Sequenciamento.

Resumo

A enzima mitocondrial glutamato desidrogenase (GDH: EC 1.4.1.2) catalisa a desaminação reversível do L-glutamato para 2-oxoglutarato (α-cetoglutarato) usando o NAD+ e NADP+ como coenzimas. É uma das mais importantes enzimas hepáticas encontradas em hepatócitos de bovinos, ovinos e caprinos. Infecções por Fasciola spp., intoxicação grave aguda por toxinas de plantas, tais como Xanthium spp. e Senecio spp. e intoxicação por cobre resultam na liberação dessa enzima no sangue. O aumento da GDH indica danos ou necrose hepática em bovinos e ovinos. Esta é a enzima de escolha para avaliar a função hepática dos ruminantes. No presente trabalho o cDNA que codifica a enzima GDH do hepatócito de ovino foi sintetizado por meio de RT-PCR utilizando mRNA extraído do fígado de ovino. Parte da região de codificação do cDNA da GDH de ovino foi amplificada por PCR usando oligonucleotídeos iniciadores sintetizados a partir do alinhamento de sequências de ORFs de Ovis aries, Bos taurus, Homo sapiens, Rattus norvegicus e Mus musculus disponíveis em banco de dados. O cDNA foi clonado no vetor pGEM®-T Easy (Promega) e inserido em células cálcio-competentes de Escherichia coli DH10B através de choque térmico. O DNA plasmidial foi purificado e após o sequenciamento a presença de um inserto de 1292 pb foi confirmado. O alinhamento da sequência deduzida de aminoácidos com outras espécies revelou alta homologia entre as GDH.

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Como Citar

MELLO, S. R. de; TAVARES, K. C. S.; ROSA, C. A. da V. L.; MILETTI, L. C. Clonagem do cDNA e sequenciamento parcial do gene que codifica a enzima glutamato desidrogenase hepática de ovino. Revista de Ciências Agroveterinárias, Lages, v. 12, n. 2, p. 119-128, 2014. Disponível em: https://www.revistas.udesc.br/index.php/agroveterinaria/article/view/5205. Acesso em: 29 jan. 2022.

Edição

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Artigo Completo - Áreas Correlatas